氨基硅胶使用方法
氨基硅胶是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道;但是要注意到的是:正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的,对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。
氨基硅胶的使用:
需要注意的是,氨基填料的键合官能团氨丙基要比C
18,C
8填料的键合官能团C
18,C
8要容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件下使用时,要特别注意控制PH值范围,
PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以,在使用后以及准备长时间放置该填料时,必要的清洗和将氨基填料保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
氨基填料的清洗
简单说起来,正相条件下使用的氨基硅胶你就参照硅胶硅胶的清洗方法;反相条件下使用的氨基硅胶你就参照C
18的清洗方法。
平时在正相条件下使用:
首先用50倍填料体积的异丙醇清洗,因异丙醇粘度较大可适当放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之后,用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相,即可。
平时在反相条件下使用:
缓冲盐应及时冲洗,以及
不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等,属常识就不作特别交待了。
用50倍纯甲醇冲洗;之后,用异丙醇过渡后,用二氯甲烷冲洗色谱填料;之后,再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱填料表现行为为诸如填料压增高填料效降低等
氨基填料的详细使用方法
1. 氨基填料既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的,正常情况新氨基填料保存在正相环境中,例如保存在正己烷-乙腈(99:1)中。
2. 正相使用
2.1 新填料可直接用流动相,推荐先用正己烷-乙腈(99:1)冲10倍填料体积,再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍填料体积,最后换成流动相。
2.2正相使用时,不宜分离含醛基、羰基的化合物,不可用于还原糖的分离;流动相不得含有羰基化合物和过氧化物(质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量)。
2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与填料原保存液可互溶。
3 反相使用
3.1 先用正己烷-乙腈(99:1) 冲10倍填料体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲填料。
3.2 用30倍填料体积的pH=11.0的氢氧化钠水溶液冲填料(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(30倍填料体积)冲洗,再换成流动相。
3.3 配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取。
3.4 反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH 3.0-7.0
3.5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在填料内的析出。
3.6 有一种情况是,当使用氨基填料进行酸性物质的分离时,酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的物质保留性质有所改变或表现在填料效下降。建议:用5-10倍的填料体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该填料(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行分离这类酸性物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。
4 色谱填料的保存
4.1 正相使用时,将填料冲洗干净后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
4.2 反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷保存。
5色谱填料的再生
5.1 方案1:依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲填料(20倍填料体积),再换流动相。这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱填料表现行为为诸如填料压增高填料效降低等。
5.2 方案2:NH2填料用于反相条件时,NH2键会水解,尤其是在该填料pH范围以外,在极端酸性和碱性条件下填料寿命会下降很快,如果在这个条件下使用需要清洗一下,需要用10倍填料体积溶液冲洗,如下:
95%水5%乙腈
THF四氢呋喃
95%乙腈5%水
并保持95%乙腈5%水继续冲洗,以低流速长时间冲洗。
5.3 方案3:填料使用一定时间后,填料效下降,老化,也可清洗一下填料恢复填料性能,清洗时依次用10倍填料体积的下列溶液冲洗:
95%水5%乙腈
THF四氢呋喃
95%乙腈5%水
再走流动相即可
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